Résumé :
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L'objectif de mon sujet de thèse était de développer un nouveau type de vecteur viral pour le transfert de gènes, et de faire la preuve de concept de l'efficacité de ce vecteur en culture de cellules et chez la souris. L'idée centrale est de se servir de la très grande capacité transgénique du virus de l'herpès simplex de type 1 (HSV-1) pour transformer le génome de ce virus en une sorte de plateforme, ou rampe de lancement, qui permettra la production in vivo d'un vecteur herpétique secondaire de type amplicon, qui portera le transgène thérapeutique à d'autres cellules, augmentant ainsi significativement le nombre de cellules qui recevront le transgène. Cette plateforme pourra également être utilisée en culture de cellules, pour améliorer la production de vecteurs amplicons non contaminés par du virus auxiliaire.De plus, les vecteurs amplicons ainsi produits, in vivo comme in vitro, ne porteront pas de séquences d'ADN bactériennes. L'élimination de l'ADN bactérien est très importante, tant pour diminuer la réponse cellulaire innée induite par la pénétration du vecteur, que pour éviter la répression de l'expression transgénique. Dans le système de vecteurs que nous nous proposons de développer, le génome d'un vecteur herpétique de type amplicon, entouré par deux sites loxP en orientation parallèle, se trouvera intégré dans le génome d'un virus herpétique recombinant. Dans les cellules infectées par le vecteur herpétique recombinant, et sous l'action de la recombinase Cre, legénome de l'amplicon sera dissocié du génome herpétique le contenant, générant ainsi deux génomes séparés dans le noyau de chaque cellule. Après dissociation, le génome du virus recombinant deviendra défectif à cause de la perte des signaux d'encapsidation (qui seront excisés avec le génome amplicon) et servira en tant que génome auxiliaire, permettant l'amplification et l'encapsidation du génome amplicon, portant le transgène, dans des particules herpétiques. Dans la mesure où chaque cellule infectée par le vecteur recombinant deviendra une usine à produire des amplicons, le nombre de cellules recevant le transgène thérapeutique porté par les amplicons devrait être considérablement élargi. Puisque le génome amplicon sera dissocié du génome HSV-1 recombinant suite à un événement de recombinaison spécifique de site, nous avons donné à ce système le nom de "Site-specific Excision-Dependent" (SED) vectors. Ce nouveau système pourra être utilisé de deux manières différentes en fonction de la localisation du gène codant pour la recombinase Cre. D'une part, il sera utilisé pour produire des stocks de vecteurs amplicons in vitro (virus SEDVITRO), auquel cas la recombinase Cresera exprimée par les cellules dans lesquelles se fera la production d'amplicons. D'autre part, il sera utilisé pour générer des vecteurs amplicons in vivo (virus SEDVIVO), au sein de l'organisme inoculé, auquel cas la recombinase Cre sera exprimée à partir du génome du virus recombinant. (résumé de l'auteur)
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