Titre : | Vecteurs lentiviraux optimisés pour le transfert de gène intra-thymique |
Auteurs : | Ragon I, Auteur |
Type de document : | Thèse/Mémoire |
Année de publication : | 2011 |
Pages : | 144 p |
Langues: | Anglais |
Mots-clés : | déficit immunitaire combiné sévère ; différenciation cellulaire ; essai clinique ; expression tissulaire ; humain ; lignée cellulaire ; lymphocyte T ; promoteur (génétique) ; récepteur T ; souris ; souris modèle ; thérapie génique ; transfert de gène ; vecteur lentiviral |
Résumé : |
Le succès thérapeutique pour le traitement des enfants-bulles atteints de déficit immunitaire combiné sévère (DICS) dans les années 2000 a soulevé un grand espoir pour la thérapie génique. Ce protocole a montré la fonctionnalité d'une approche de transfert de gène utilisant des vecteurs, ainsi que son potentiel, mais aussi ses limites. Malheureusement certains patients de ces essais ont développé des leucémies dues à une mutagénèse insertionnelle qui a conduit à l'activation d'un proto-oncogène.
Notre projet cherche à rendre les vecteurs lentiviraux plus sûrs pour une utilisation en thérapie génique. Notre modèle de travail est un variant de DICS, ZAP-70. La mutation de cette protéine, impliquée dans la transduction du signal après stimulation des lymphocytes T au niveau du TCR, est caractérisée par un blocage de la différenciation des cellules T. Dans le cadre de cette maladie, la stratégie adoptée est d'utiliser un promoteur spécifique des lymphocytes T. Pour cela un enhancer/promoteur minimal du CD4 humain (CD4s) a été développé au sein du laboratoire. Il est composé des éléments essentiels du promoteur CD4 humain accompagné d'une copie de l'enhancer CD4 murin. Un vecteur lentiviral exprimant ZAP-70 sous son influence a prouvé sa fonctionnalité dans le cadre d'injection intra-thymique dans des souris ZAP-70-/- qui ont développé un système immunitaire fonctionnel. Un bon vecteur de thérapie génique doit s'efforcer d'avoir un bon niveau d'expression, de s'exprimer dans les bonnes cellules et de ne pas déclencher d'effets délétères... L'étude de ces vecteurs dans différentes lignées cellulaires a fait ressortir différents points: (a) la présence du WPRE n'est pas nécessaire dans notre système pour obtenir un niveau d'expression correct, (b) la présence d'insulateurs permet une extinction d'expression dans une lignée cellulaire non cible et (c) Les versions longue et courte du CD4 ont un niveau d'expression équivalent après infection de cellules cibles par des vecteurs insulés. De plus, ce vecteur exprimant une casette exprimant ZAP-70 a permis la reconstitution de souris déficientes en ZAP-70, démontrant que les différentes modifications apportées au vecteur n'ont pas perturbé sa fonctionnalité ni son efficacité. Pour augmenter la sécurité du vecteur l'addition d'un gène suicide dans le vecteur est envisagée. |
Type de thèse : | Thèse |