Résumé :
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Dans ce travail nous nous sommes intéressés à la synthèse et à l'utilisation d'un certain nombre de molécules sondes reconnues par le système cholinergique (acétyl-cholinestérase et récepteur cholinergique nicotinique). Dans une première partie, nous voulons montrer que le marquage par photoaffinité de l'acétylcholinestérase pourrait donner naissance à une nouvelle sonde froide à ADN. L'idée est d'hybrider un brin d'ADN dénaturé à un oligonucléotide de synthèse portant un synthon bifonctionnel, marqueur de photoaffinité de l'enzyme. L'acétylcholinestérase partiellement alkylée doit servir de révélateur du complexe covalent par l'intermédiaire d'un test colorimétrique. La synthèse d'une molécule sonde modèle, ainsi que les tests biochimiques relatifs au marquage de l'enzyme sont décrits. Dans une deuxième partie, la synthèse de molécules électroniquement denses (en particulier des clusters à 11 atomes d'or et des dérivés de ces clusters liés à des ligands cholinergiques) est décrite. Ces molécules devraient permettre de localiser en microscopie électronique avec une bonne précision (<1,5 nm) les différents sites du récepteur cholinergique nicotinique. L'étude du modèle qu'est le marquage par un cluster à 11 atomes d'or de la toxine du choléra préalablement réduite par le DTT et cristallisée en deux dimensions a permis de démontrer la faisabilité de la méthode. C'est en collaboration avec l'équipe d'Alain Brisson, qui effectue les travaux de microscopie électronique, que nous avons visualisé pour la première fois les clusters à 11 atomes d'or par la méthode TEM (Transmission Electron Microscopy) dans un modèle de cristallisation bidimensionnelle. Ces conditions permettent d'observer à la fois les marqueurs lourds et l'objet protéique, ce qui n'était pas le cas jusqu'à présent par la méthode STEM (Scanning Transmission Electron Microscopy).
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